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Überblick: Meine methodischen Kenntnisse und
Erfahrungen
Bedingt durch die sehr breit
angelegte Thematik meiner Diplom- und Promotionsarbeit habe ich mir einen sehr großen
Erfahrungsschatz an molekularbiologischen, proteinchemischen und immunologischen Methoden
erarbeitet, den ich in Theorie und Praxis jederzeit anwendbar beherrsche.
Molekularbiologische Methoden
- Isolierung von Nukleinsäuren (RNA,
genomische DNA, Plasmid-DNA, Phagen-DNA)
- Elektrophoretische Auftrennung von DNA bzw.
RNA in Agarose- und Polyacrylamidgelen
- Diverse Klonierungstechniken
- Radioaktive (32P) und
nichtradioaktive (DIG-System) Markierung von DNA
- Screening von cDNA- bzw. genomischen
Genbanken
- Sequenzierung am "ALFexpress DNA
Sequencer" der Fa. Pharmacia
- Blot-Techniken (Northern-, Southern-Blot)
- Verschiedene PCR-Techniken am "Gene
Amp PCR System 9600" der Fa. Perkin Elmer (Standard-PCR-Anwendungen,
Reverse-Transkription/PCR, "Nested"-PCR, "RACE"-PCR,
DNA-"Walking")
- Gewinnung rekombinanter Proteine durch
Überexpression in prokaryontischen (E.coli) und
eukaryontischen (Baculo-Virus System) Zellen
- Transfektion eukaryontischer Zellen
- Promotoraktivitäts-Bestimmung durch
Reportergen (Luciferase)-Assays
- Identifizierung von
Protein-Protein-Wechselwirkungen mit Hilfe des Hefe Two-Hybrid Systems
(Screening einer auf dem GAL4-System basierenden Two-Hybrid cDNA-Genbank)
- Identifizierung differentiell exprimierter
Gene durch "Differential Display"-RT/PCR
Proteinchemische Methoden
- Subzelluläre Fraktionierungen (Isolierung von
Zellorganellen)
- Verschiedene ein- und zweidimensionale
Elektrophorese-Techniken in vertikalen und horizontalen
Elektrophorese-Systemen (Isoelektrische Fokussierung, SDS- bzw. native
Polyacrylamidgel-Elektro-
phorese)
- Präparative Elektrophorese und Elektroelution
- Verschiedene Proteinfärbetechniken (Silberfärbung etc.)
- Proteinmengen-Bestimmungen
- Methoden zur Umpufferung und Fällung von Proteinen
- Chromatographische Protein-Aufreinigung mit
Ionenaustausch-Chromatographie, hydrophober
Interaktions-Chromatographie, Gelfiltration, "Reverse Phase"-Chromatographie,
Affinitäts-Chro-
matographie etc. (ECONO-System, Fa. BIORAD; FPLC- und SMART-System, Fa. Pharmacia)
- Bestimmung von Enzymaktivitäten und Enzymkinetiken
(UV/VIS-Spektroskopie)
- Radioaktive (125I) Markierung von Proteinen
- Rezeptor-Bindungsstudien mit 125I-markierten
Protein-Liganden
- In vitro Translation
Immunologische Methoden
- Immunisierung von Tieren zur Generierung polyklonaler
Antikörper
- Western Blot
- Immunpräzipitation radioaktiv markierter Proteine (32P,
35S) aus Zellysaten
- Immunhistochemische Darstellung von Proteinen in
Gewebeschnitten
Zellkultur
- Kultivierung von primären Zellen (humane
Monozyten/Makrophagen, Hautfibroblasten) und von
verschiedenen Zellinien (HepG2, HeLa etc.)
- Radioaktive Markierung von Zellkulturen mit
35S und 32P
- Kultivierung und Stammhaltung von Hefen und
Bakterien
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